Posted by on 4 sierpnia 2018

Ponieważ zmutowane chondrocyty zawierały spuchniętą retikulum endoplazmatyczną, przebadaliśmy ekspresję genu odpowiedzialnego za stres i retikulum endoplazmatycznego, białko szoku cieplnego 5 (Hspa5-Bip), 8 i stwierdziliśmy, że w zmutowanych chondrocytach występuje większa ekspresja Hspa5-Bip niż w dzikich typ chondrocytów (rysunek 3A w dodatkowym dodatku). Chondrocytom od myszy zmutowanych brakowało również typowego aparatu Golgiego (Figura 3C). Zamiast wyświetlać aparat Golgiego ze skumulowaną organizacją cysternalną, zmutowane chondrocyty zawierały agregację struktur podobnych do pęcherzyków. Badanie mikroskopowe innych tkanek w zarodkowym dniu 15.5 wykazało nieprawidłowy aparat Golgiego w nerkach, ale nie w jelicie ani płucu (Figura 3C i Figura 3C w Dodatku Uzupełniającym). Pierwotne kultury fibroblastów skóry od zmutowanych myszy wykazały nienormalnie skondensowany aparat Golgiego w porównaniu z tym w fibroblastach typu dzikiego (Figura 4A). Jednakże, przedziały cis i trans-Golgi w zmutowanych fibroblastach zostały zachowane, jak wskazano przez sąsiadującą, nienakładającą się lokalizację białka osocza Golgiego 130 (GM130) (białko cis-Golgi) i czynnika podobnego do rybozylacji ADP (Arl1 ) (białko trans-Golgi) (Figura 4A). Pierwotne hodowle chondrocytów od myszy pozbawionych GMAP-210 wzrastały słabo i nie różnicowały się. Dlatego użyliśmy pierwotnych fibroblastów skóry od myszy heterozygotycznych lub homozygotycznych pod względem mutacji nonsensownej do oceny retikulum endoplazmatycznego i funkcji Golgiego. Zakażono te fibroblasty adenowirusem eksprymującym termoregulacyjny składany mutant VSVGts-GFP; ten konkretny mutant jest rozłożony i zatrzymany w retikulum endoplazmatycznym w 40 ° C, ale może się prawidłowo składać i przechodzić przez aparat Golgiego w temperaturze 32 ° C (Figura 4 i Figura 4A w Dodatku Uzupełniającym). Przetwarzanie VSVGts-GFP różniło się między komórkami homozygotycznymi i heterozygotycznymi (Figura 4C), prawdopodobnie z powodu zmienionej glikozylacji VSVGts-GFP w obrębie Golgiego homozygotycznych zmutowanych komórek, a nie upośledzonego przejścia przez aparat Golgiego. Moglibyśmy dokonać tego rozróżnienia, ponieważ transport VSVGts-GFP na powierzchnię komórki był podobny w komórkach homozygotycznych i heterozygotycznych (Figura 4 w Dodatku Aneks).
Aby potwierdzić, że modyfikacje potranslacyjne zostały zmienione w komórkach z niedoborem GMAP-210, barwiliśmy fibroblasty i sekcje szkieletowe myszy dzikich i zmutowanych lektyną GS-II. Ta forma lektyny, wyizolowana z nasion tropikalnej afrykańskiej rośliny strączkowej Griffonia simplicifolia, preferencyjnie wiąże się z końcową strukturą glikanu N-acetyloglukozaminy.9 Zwiększone wiązanie z lektyną GS-II wskazuje na upośledzoną glikozylację, ponieważ N-acetyloglukozamina jest niezbyt często występująca w prawidłowo glikozylowanych białkach. W porównaniu z fibroblastami typu dzikiego, zmutowane pierwotne fibroblasty skórne wykazywały zwiększone wiązanie lektyny GS-II wzdłuż powierzchni komórek (Figura 5 w Dodatkowym dodatku), co jest zgodne z niepełną modyfikacją białek powierzchni komórki. Ponadto zaobserwowaliśmy znaczny wzrost wiązania lektyny GS-II w chrząstce zmutowanych myszy (w porównaniu z myszami typu dzikiego), przy czym większość wiązania występuje wewnątrzkomórkowo (Figura 5 w Dodatku dodatkowym)
[podobne: dyżur aptek września, krioterapia rzeszów, leczenie falą uderzeniową ]

Powiązane tematy z artykułem: dyżur aptek września krioterapia rzeszów leczenie falą uderzeniową

Posted by on 4 sierpnia 2018

Ponieważ zmutowane chondrocyty zawierały spuchniętą retikulum endoplazmatyczną, przebadaliśmy ekspresję genu odpowiedzialnego za stres i retikulum endoplazmatycznego, białko szoku cieplnego 5 (Hspa5-Bip), 8 i stwierdziliśmy, że w zmutowanych chondrocytach występuje większa ekspresja Hspa5-Bip niż w dzikich typ chondrocytów (rysunek 3A w dodatkowym dodatku). Chondrocytom od myszy zmutowanych brakowało również typowego aparatu Golgiego (Figura 3C). Zamiast wyświetlać aparat Golgiego ze skumulowaną organizacją cysternalną, zmutowane chondrocyty zawierały agregację struktur podobnych do pęcherzyków. Badanie mikroskopowe innych tkanek w zarodkowym dniu 15.5 wykazało nieprawidłowy aparat Golgiego w nerkach, ale nie w jelicie ani płucu (Figura 3C i Figura 3C w Dodatku Uzupełniającym). Pierwotne kultury fibroblastów skóry od zmutowanych myszy wykazały nienormalnie skondensowany aparat Golgiego w porównaniu z tym w fibroblastach typu dzikiego (Figura 4A). Jednakże, przedziały cis i trans-Golgi w zmutowanych fibroblastach zostały zachowane, jak wskazano przez sąsiadującą, nienakładającą się lokalizację białka osocza Golgiego 130 (GM130) (białko cis-Golgi) i czynnika podobnego do rybozylacji ADP (Arl1 ) (białko trans-Golgi) (Figura 4A). Pierwotne hodowle chondrocytów od myszy pozbawionych GMAP-210 wzrastały słabo i nie różnicowały się. Dlatego użyliśmy pierwotnych fibroblastów skóry od myszy heterozygotycznych lub homozygotycznych pod względem mutacji nonsensownej do oceny retikulum endoplazmatycznego i funkcji Golgiego. Zakażono te fibroblasty adenowirusem eksprymującym termoregulacyjny składany mutant VSVGts-GFP; ten konkretny mutant jest rozłożony i zatrzymany w retikulum endoplazmatycznym w 40 ° C, ale może się prawidłowo składać i przechodzić przez aparat Golgiego w temperaturze 32 ° C (Figura 4 i Figura 4A w Dodatku Uzupełniającym). Przetwarzanie VSVGts-GFP różniło się między komórkami homozygotycznymi i heterozygotycznymi (Figura 4C), prawdopodobnie z powodu zmienionej glikozylacji VSVGts-GFP w obrębie Golgiego homozygotycznych zmutowanych komórek, a nie upośledzonego przejścia przez aparat Golgiego. Moglibyśmy dokonać tego rozróżnienia, ponieważ transport VSVGts-GFP na powierzchnię komórki był podobny w komórkach homozygotycznych i heterozygotycznych (Figura 4 w Dodatku Aneks).
Aby potwierdzić, że modyfikacje potranslacyjne zostały zmienione w komórkach z niedoborem GMAP-210, barwiliśmy fibroblasty i sekcje szkieletowe myszy dzikich i zmutowanych lektyną GS-II. Ta forma lektyny, wyizolowana z nasion tropikalnej afrykańskiej rośliny strączkowej Griffonia simplicifolia, preferencyjnie wiąże się z końcową strukturą glikanu N-acetyloglukozaminy.9 Zwiększone wiązanie z lektyną GS-II wskazuje na upośledzoną glikozylację, ponieważ N-acetyloglukozamina jest niezbyt często występująca w prawidłowo glikozylowanych białkach. W porównaniu z fibroblastami typu dzikiego, zmutowane pierwotne fibroblasty skórne wykazywały zwiększone wiązanie lektyny GS-II wzdłuż powierzchni komórek (Figura 5 w Dodatkowym dodatku), co jest zgodne z niepełną modyfikacją białek powierzchni komórki. Ponadto zaobserwowaliśmy znaczny wzrost wiązania lektyny GS-II w chrząstce zmutowanych myszy (w porównaniu z myszami typu dzikiego), przy czym większość wiązania występuje wewnątrzkomórkowo (Figura 5 w Dodatku dodatkowym)
[podobne: dyżur aptek września, krioterapia rzeszów, leczenie falą uderzeniową ]

Powiązane tematy z artykułem: dyżur aptek września krioterapia rzeszów leczenie falą uderzeniową